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一步法與傳統ELISA的區別

一、夾心法根據操作步驟又分為一步法、兩步法、三步法,三者之間的區別歸納如下:

二、ELISA競爭法和夾心法的區別:

競爭法(competitive ELISA):

小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,的顯色也愈淺。


優點:適用于小分子抗原,數據再現性很高。


缺點:整體的敏感性和特異性都較差。

夾心法(sandwich ELISA):


被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其中一個抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶標記后直接測定抗原的量;或不標記,再透過酶標記的二抗體來測定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取,才可避免交互反應或競爭相同的抗原結合部位。


優點:高靈敏、高特異性,抗原無須事先純化。


缺點:抗原一定得擁有兩個以上的抗體結合部位。


 競爭法和夾心法的相同點:兩種方法都是檢測抗原物質。


  不同點:競爭法是用于檢測小分子抗原物質,只有一個反應位點,沒法用夾心法方法檢測。而大分子抗原更適用于夾心法(也可以用競爭法),因為夾心法實驗結果特異性和靈敏度更好。

注意:不同物質的適用原理可能不同,所以并沒有說競爭法的一定比夾心法做的結果好,同樣夾心法的也不一定比競爭法的結果好。我根據不同項目用方法的盒子。

三:即用型標準品(稀釋好的液體標準品)和高濃度單試劑標準品(粉劑標準品)的優劣勢


即用型:

優勢:使用更加方便,拆開即用不需要再另外稀釋,使用線性會更好


劣勢:保存時間比較短,穩定性容易受保存條件和時間的影響


粉劑標準品: 


優勢:保存時間更長,試劑穩定性更好,可根據需求配置自己的需要的標準濃度


劣勢:需要自己稀釋線性濃度,操作比較麻煩,稀釋線性容易出現問題

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