支原體會對細胞培養造成嚴重危害。同時,其發生率高,不易用肉眼察覺。據報道,在細胞培養室中,其平均發病率甚至可以高達63%。在生物制品中,其發病率為1%-3%。
有五種可能污染細胞的支原體來源:
1.環境
2.受污染的細胞
3.攜帶人體表面(如嘴、鼻子、皮膚等)
4.實驗試劑,如培養基、胰蛋白酶等
5.實驗室儀器未徹底消毒
支原體檢測的傳統方法是什么?
方法1:培養法。直接將待測樣品涂覆在支原體的液體或固體培養基上,使其生長。通常,需要幾個星期才能看到*液體變渾濁或*菌落生長。培養法是支原體檢測最經典的方法。其優點是:靈敏度適中,結果可靠。然而,培養方法的主要缺點之一是時間周期太長,不能用作細胞污染的快速檢測方法。
方法2:DNA熒光染色。熒光染料(如Hoechst 33258,DAPI)可以與細胞和支原體的DNA結合。被支原體污染的細胞染色后,如果細胞核外和細胞周圍能看到許多大小均勻的熒光點,即支原體的DNA,則證明存在支原體污染。該方法比培養法快,但靈敏度差。當通過熒光染色檢測到支原體時,去除支原體相對困難。
方法3:掃描電子顯微鏡。拍攝細胞樣本的掃描電子顯微鏡照片。如果被支原體污染,細胞表面可以看到密集的小顆粒。這種方法不適用于常規實驗室測試,因為它使用電子顯微鏡。
方法4:PCR。PCR相對快速和靈敏。這是目前實驗室中最常用的支原體檢測方法。然而,PCR方法也有其致命的缺點:細胞培養基的上清液中經常含有強烈抑制PCR擴增的代謝物。由于許多研究人員直接使用細胞培養液的上清液進行PCR檢測,如果檢測結果為陰性,則認為沒有支原體污染。事實上,還有一種可能性是,PCR的擴增受到細胞代謝產物的抑制,而不是沒有支原體污染!
一般來說,應丟棄受污染的細胞,以避免成為污染源。但對于珍貴的細胞,可以使用Minerva Biolabs的Mynox®或Mynox Gold®過去,其他品牌的支原體清除劑只是抑制劑,抑制了支原體的DNA合成和蛋白質合成,但無法殺死。Mynox®是市場上*具有殺滅效果的清道夫。它是從枯草芽孢桿菌中提取出來的,可以特異性地與支原體膜結合,破壞膜的通透性,導致支原體的擴張和破裂并死亡。使用Mynox®通常,清潔任務可以在2-3小時內完成。
Mynox Gold®是Mynox®,經過四個療程治療。每個療程是一代細胞。它包括Mynox®,還含有復合*成分。過去,其他品牌的支原體清除劑只是支原體的*成分,但也容易產生耐藥性。Mynox Gold®Mynox®與*相結合,它結合了兩者的優點,并消除了兩者的缺點,因為某些細胞對Mynox®治療敏感,而Mynox Gold™比Mynox®更溫和,對細胞毒性小,因此更適合脆弱和營養不足的細胞。