在現(xiàn)代規(guī)模化養(yǎng)豬生產(chǎn)中，雖然采取了各種良好的飼養(yǎng)管理和防疫措施，但疾病仍時(shí)有發(fā)生，很多時(shí)候會(huì)造成嚴(yán)重?fù)p失。為降低疾病的發(fā)生，為疫苗免疫做好科學(xué)的指導(dǎo)，非常有必要了解豬體內(nèi)的有效抗體水平，這就必須開展抗體水平監(jiān)測(cè)。

目前對(duì)抗體水平檢測(cè)的方法很多，如ELISA檢測(cè)法、DOT-ELISA檢測(cè)法和間接血凝法等，這些檢測(cè)技術(shù)雖然具有微量、特異的優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)檢測(cè)條件、設(shè)備配備和人員操作的技術(shù)水平要求較高，而且檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，檢測(cè)程序繁瑣，檢測(cè)成本很高，不適合基層獸醫(yī)和養(yǎng)殖場(chǎng)使用。

快速抗體檢測(cè)試紙基于膠體金免疫層析技術(shù)，其檢測(cè)結(jié)果的特異性及靈敏度大大提高，而且樣品不必預(yù)處理，也大大降低了實(shí)驗(yàn)過程中的人為誤差和工作強(qiáng)度。

實(shí)際操作中只需要按照產(chǎn)品說明進(jìn)行簡(jiǎn)單的操作，不需要任何額外配備儀器設(shè)備，已廣泛應(yīng)用在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)中，適用于不同的檢疫和診斷機(jī)構(gòu)，更適合于基層獸醫(yī)及養(yǎng)殖場(chǎng)使用，為動(dòng)物疫病的早期診斷和適時(shí)免疫提供了新的技術(shù)手段。

豬瘟抗體快速檢測(cè)試紙采用酶聯(lián)免疫原理和膠體金層折技術(shù)制成，快速檢測(cè)豬血清中的豬瘟抗體，當(dāng)血清加入加樣孔內(nèi)，由于層析的原理，血清開始沿紙條移動(dòng)擋遇上干燥的金標(biāo)抗原，將其溶解，并帶著金標(biāo)抗原繼續(xù)往上移動(dòng)，至硝酸纖維素膜的檢測(cè)線。如果樣品中有豬瘟抗體存在時(shí)，會(huì)與玻璃纖維素膜上的金標(biāo)豬瘟抗原和包被在檢測(cè)線上的豬瘟抗原，在檢測(cè)線(T)上形成一個(gè)夾心的免疫復(fù)合物，呈一條紫紅色線。樣品中的抗體越高，色線顏色越深，判定為陽性。

如果樣品中沒有豬瘟抗體，在檢測(cè)線(T)上沒有色帶出現(xiàn)，判定為陰性。樣品和金標(biāo)抗原繼續(xù)往上移至質(zhì)控線(C)時(shí)，此處的兔抗瘟抗體將會(huì)同金標(biāo)豬瘟抗原結(jié)合，在質(zhì)控線(C)上形成一條紫紅色線，證明本試紙有效。整個(gè)試驗(yàn)僅需10-15分鐘。操作簡(jiǎn)便，快速，靈敏度高，準(zhǔn)確率達(dá)98％以上，直觀，結(jié)果容易判定。口蹄疫、偽狂犬、藍(lán)耳病檢測(cè)原理同豬瘟。

【樣本要求】

1.本檢測(cè)卡僅適用于檢測(cè)豬血清/全血。

2. 血清：按常規(guī)方法抽取2-3ml血液置潔凈干燥的試管中，靜置約1小時(shí)待血液凝固后于4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10 分鐘（也可將血液靜置約2小時(shí)，待血液凝固自然析出血清），分離血清。要求血清清亮，無溶血、無污染。血清樣本短期可于2～8℃保存，長(zhǎng)期需置-20℃保存。

3. 全血：采集新鮮抗凝全血當(dāng)天使用，未加抗凝劑的全血現(xiàn)采現(xiàn)用。

【試驗(yàn)方法】

1.血清/全血加樣方式：撕開檢測(cè)卡鋁箔包裝袋，取出檢測(cè)卡，放于平整、潔凈的臺(tái)面上,使用袋內(nèi)吸管取1滴血清或2滴全血緩慢滴加到加樣孔內(nèi)，再滴加2滴稀釋液到加樣孔。

2. 室溫下放置，10-15 分鐘判斷結(jié)果,15 分鐘后的顯色結(jié)果無效。

【結(jié)果判斷】

1.陰性：在觀察孔內(nèi)，只有對(duì)照線區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色線。

2. 陽性：在觀察孔內(nèi)，檢測(cè)線區(qū)（T）及對(duì)照線區(qū)（C）同時(shí)出現(xiàn)紫紅色線。抗體滴度越高，檢測(cè)線（T）顏色越深。

3. 無效：在觀察孔內(nèi)，對(duì)照線區(qū)（C）不出現(xiàn)紫紅色線。

【診斷參考】

1、  如果該豬未接種過豬瘟病毒疫苗：

A. 當(dāng)被檢樣品檢測(cè)線 T 處無明顯色帶出現(xiàn)，該樣本中不含有豬瘟病毒抗體，如果種群健康，則表示沒有豬瘟病毒感染，應(yīng)當(dāng)及時(shí)進(jìn)行豬瘟病毒疫苗接種。如果出現(xiàn)相應(yīng)的急性癥狀，則不能排除有豬瘟病毒感染。

B. 當(dāng)被檢樣品檢測(cè)線 T 處有明顯色帶出現(xiàn)，則該動(dòng)物存在豬瘟病毒感染，或既往感染，應(yīng)進(jìn)一步驗(yàn)證。

2、 如果該豬已接種過豬瘟病毒疫苗：

A. 當(dāng)被檢樣品檢測(cè)線 T 條帶的色澤≥對(duì)照卡中 1:32 效價(jià)時(shí)，說明豬瘟病毒抗體的滴度較高，已達(dá)到抵御野毒攻擊的保護(hù)水平，同時(shí)說明感染野毒的可能性較小。

B. 當(dāng)被檢樣品檢測(cè)線T 條帶的色澤＜對(duì)照卡中 1:32 效價(jià)時(shí)，說明豬瘟病毒抗體效價(jià)未達(dá)到抵御豬瘟病毒野毒攻擊的*保護(hù)滴度，存在感染野毒的風(fēng)險(xiǎn)，建議進(jìn)行疫苗補(bǔ)種。

3、檢測(cè)范圍

外調(diào)種豬須逐個(gè)檢測(cè)，育肥豬按10％-15％比例抽檢。

自繁種豬檢測(cè)，豬瘟效價(jià)應(yīng)不低于1：32，抽檢比例為10%-20%。

仔豬出生首日-5日齡，測(cè)其母源抗體，首免后15-20天，二免后10-15天進(jìn)行抗體檢測(cè)，檢測(cè)比例為3％-5％，豬瘟效價(jià)不能低于1：32。

4、注意事項(xiàng)

檢測(cè)卡從鋁箔袋取出后應(yīng)盡快使用，受潮后檢測(cè)卡將失效。

檢測(cè)卡應(yīng)在30℃以下保存，不可冷凍，保存有效期為24個(gè)月。

口蹄疫、偽狂犬、藍(lán)耳病抗體檢測(cè)卡使用方法同豬瘟。

1、檢測(cè)卡可用于檢驗(yàn)豬瘟疫苗的質(zhì)量和確定免疫的最適劑量

如養(yǎng)豬場(chǎng)購買大批量的豬瘟疫苗放在自己場(chǎng)里的冰箱冷凍層內(nèi)，每次*購買同一批號(hào)(一般以生產(chǎn)日期定批號(hào))的豬瘟疫苗。可以從中取出一瓶疫苗，選擇不同日齡的乳豬、小豬、種豬若干頭，分別應(yīng)用2頭份、3頭份、4頭份、5頭份豬瘟疫苗進(jìn)行免疫接種，免疫15天后采血，用抗體免疫金標(biāo)檢測(cè)卡測(cè)定抗體滴度。

如果各組都能產(chǎn)生抵抗豬病強(qiáng)毒攻擊的免疫抗體時(shí)，則可以從中選擇免疫頭份少，抗體滴度高作為本批號(hào)疫苗*免疫劑量。如果檢測(cè)的豬瘟抗體達(dá)不到強(qiáng)毒攻擊的*保護(hù)強(qiáng)度時(shí)，則應(yīng)當(dāng)檢查是否是疫苗本身問題，還是豬群存在有免疫抑制病毒(如圓環(huán)病毒)的干擾。這時(shí)可以采取更換該廠家不同批號(hào)的豬瘟疫苗或另選廠家的豬瘟疫苗，再按上述方法進(jìn)行不同劑量免疫，來確定是否是該批疫苗失效或是免疫抑制病毒的干擾，判定適宜的免疫劑量。

2、當(dāng)母豬分娩時(shí)，用豬瘟抗體快速檢測(cè)卡檢測(cè)母豬的抗體水平

如果在試紙條上只出現(xiàn)1條色線(質(zhì)控線C)，說明母豬體內(nèi)的豬瘟抗體滴度已低于抵抗豬瘟強(qiáng)毒攻擊的*保護(hù)強(qiáng)度，母豬應(yīng)當(dāng)及時(shí)進(jìn)行豬瘟疫苗接種，同時(shí)乳豬應(yīng)當(dāng)及時(shí)采用超前免疫，以免發(fā)生豬瘟病。如果試紙條上出現(xiàn)2條色線，說明豬體內(nèi)的豬瘟抗體滴度較高，可以抵抗豬瘟強(qiáng)毒的攻擊，就不需要進(jìn)行超前免疫。因?yàn)樽胸i可以通過初乳獲得母源抗體，這時(shí)仔豬可以按照正常的免疫程序進(jìn)行預(yù)防注射。

3、外購仔豬或者種豬時(shí)檢測(cè)抗體狀況和免疫情況

當(dāng)從外地購進(jìn)大批量的小豬或種豬時(shí)，飼養(yǎng)主自己無法了解購買的小豬是否進(jìn)行過豬瘟疫苗免疫或免疫是否有效，應(yīng)使用檢測(cè)卡。為了防止豬瘟病發(fā)生，選擇什么時(shí)間再進(jìn)行豬瘟免疫最適宜時(shí)，則可以根據(jù)不同地區(qū)、不同日齡的豬，選擇有代表性的豬采血，應(yīng)用豬瘟抗體免疫金標(biāo)檢測(cè)卡進(jìn)行快速檢測(cè)。通過檢測(cè)結(jié)果，可以了解整個(gè)豬群豬瘟抗體的狀況，以便決定是否及時(shí)開展免疫及選擇適宜的免疫劑量，這樣可以避免豬瘟病的發(fā)生。

4、在懷疑發(fā)生豬瘟病時(shí)，可以采集病豬血清(或血液)用豬瘟抗體快速檢測(cè)卡檢測(cè)

如果發(fā)生豬瘟病，豬體血液中沒有豬瘟抗體或抗體滴度很低。當(dāng)然，發(fā)生豬瘟而耐過不死的豬，抗體滴度可能會(huì)很高。其他疾病（偽狂犬、圓環(huán)、藍(lán)耳、口蹄疫）檢測(cè)道理同豬瘟病的檢測(cè)方法。

5、進(jìn)行疫病監(jiān)測(cè)時(shí)，可應(yīng)用抗體免疫金標(biāo)檢測(cè)卡進(jìn)行快速檢測(cè)

如豬場(chǎng)發(fā)生豬瘟病時(shí)，常規(guī)的處理程序是全面隔離消毒和緊急預(yù)防注射。此時(shí)豬群特別是種豬場(chǎng)的豬群的抗體滴度差異很大，緊急預(yù)防注射疫苗后的抗體滴度水平又會(huì)出現(xiàn)明顯的差異。因此，還應(yīng)當(dāng)重新了解豬瘟抗體水平，以制定合理的免疫程序，確保豬場(chǎng)的科學(xué)保健。